一抗（即第一抗體）是一種能夠特異性結(jié)合特定抗原的蛋白質(zhì)，用于識(shí)別和檢測(cè)目標(biāo)蛋白。一抗主要分為單克隆抗體和多克隆抗體兩大類。單克隆抗體針對(duì)單一表位，具有高度特異性，而多克隆抗體則能夠識(shí)別抗原的多個(gè)表位，具有較廣的反應(yīng)性。選擇合適的一抗是檢測(cè)靶蛋白的關(guān)鍵，因?yàn)椴煌膶?shí)驗(yàn)需求可能需要不同類型的抗體。那么，如何選擇適合的一抗呢？
確定實(shí)驗(yàn)應(yīng)用類型
根據(jù)實(shí)驗(yàn)種類選擇合適的抗體，如WB（蛋白質(zhì)印跡）、IP（免疫沉淀）、co-IP（免疫共沉淀）、Pull-down（體外蛋白結(jié)合實(shí)驗(yàn)）、IHC（免疫組織化學(xué)）、ICC（免疫細(xì)胞化學(xué)）、ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）、FCM（流式細(xì)胞術(shù)）分析等，抗體說(shuō)明書會(huì)列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)適用于何種實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。
(如未提及并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說(shuō)明尚未經(jīng)過(guò)此種分析試驗(yàn)驗(yàn)證。如果抗體不適用某些分析試驗(yàn)，則會(huì)在抗體說(shuō)明書上標(biāo)注出來(lái)不適于某分析試驗(yàn)，這點(diǎn)很重要哦~)
確定實(shí)驗(yàn)樣本的種屬
確定實(shí)驗(yàn)所用樣本的種屬，如Human（人）、Rat（大鼠）、Mouse（小鼠）、Goat（山羊）等。應(yīng)選擇針對(duì)相同物種或具有交叉反應(yīng)性的抗體，因?yàn)檫@些物種間的氨基酸序列具有較高同源性，抗體可能會(huì)與不同物種的同種靶蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)。
(如樣本的種類未列入抗體說(shuō)明書上的交叉反應(yīng)種屬表中，并不意味著該抗體不適用于檢測(cè)該物種的蛋白，而只是表示該物種尚未用此抗體檢測(cè)驗(yàn)證過(guò)?？梢酝ㄟ^(guò)序列比對(duì)的方法來(lái)預(yù)測(cè)交叉反應(yīng)，可應(yīng)用Expasy和NCBI BLAST來(lái)進(jìn)行不同物種蛋白同源性比對(duì)。如果比對(duì)結(jié)果，證明同源性比較高的，也可以選擇。)
分析樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)
分析樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)以選擇合適的抗體。
（1）抗體是由各種不同免疫原去免疫宿主而制備得來(lái)，免疫原包括：全長(zhǎng)蛋白、蛋白片段、多肽、全有機(jī)體（如：細(xì)菌）或細(xì)胞。
（2）抗體說(shuō)明書一般都有免疫原的描述，如果打算檢測(cè)的是蛋白片段或一種特殊的同型物或蛋白全長(zhǎng)的某一區(qū)域，則必須選擇用含此片段域的免疫原制備出的抗體。
（3）如果打算用FCM流式檢測(cè)活細(xì)胞的表面蛋白，則需要選擇含該表面蛋白的胞外域來(lái)免疫制備的抗體。
特異性與靈敏度
一抗應(yīng)能特異性識(shí)別目標(biāo)蛋白，避免非特異性結(jié)合。同時(shí)，一抗的靈敏度也至關(guān)重要，它應(yīng)能檢測(cè)到實(shí)驗(yàn)中目標(biāo)蛋白的濃度。查閱抗體生產(chǎn)商提供的數(shù)據(jù)或在數(shù)據(jù)庫(kù)如CiteAb、Antibodypedia中查看抗體的驗(yàn)證信息，可以確認(rèn)其在實(shí)驗(yàn)中的特異性與靈敏度。
表位識(shí)別
抗體識(shí)別的表位應(yīng)位于目標(biāo)蛋白的保守區(qū)域，確?？贵w在不同變異或剪接形式中的識(shí)別能力。根據(jù)研究目的，選擇識(shí)別修飾或非修飾表位的抗體。
實(shí)驗(yàn)操作條件
一抗的使用需考慮實(shí)驗(yàn)條件，包括溫度、pH、緩沖液類型等，以確?？贵w的最佳性能。
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