主要優(yōu)勢：
1.含有特有的強有力的AOX(醇氧化酶基因)啟動子，用甲醇可嚴(yán)格地調(diào)控外源基因的表達(dá)
2.產(chǎn)物易分離，畢赤酵母所用發(fā)酵培養(yǎng)基十分廉價，一般碳源為甘油或葡萄糖及甲醇，其余為無機鹽，培養(yǎng)基中不含蛋白，有利于下游產(chǎn)品分離純化
3.外源蛋白基因遺傳穩(wěn)定，外源基因能以高拷貝數(shù)整合到畢赤酵母基因組中，不易丟失并能夠得到高表達(dá)菌株
4.作為真核表達(dá)系統(tǒng)，畢赤酵母具有真核生物的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻譯后修飾加工功能
表達(dá)菌株特點：
GS115：AOX1和AOX2基因都正常表達(dá)AOX蛋白(乙醇氧化酶)，甲醇的利用效率高，接近于野生型，屬于甲醇快速利用型(Mut+)
KM71：AOX1基因被大部分剔除，只能利用AOX2為AOX編碼，甲醇利用速率變慢，表現(xiàn)為甲醇慢利用型(Muts)
外源基因的整合方式不同會導(dǎo)致表達(dá)菌株的表型不同：
Table 1. 酵母菌株表型
| 限制酶 | 插入位點 | GS115 表型 | KM71 表型 |
| Sa1 I/StuI | HIS4 | HIS+Mut+ | HIS+Muts |
| SacI | 5’AOX1 | HIS+Mut+ | HIS+Muts |
| Bg1 II | 取代AOX1 | HIS+Muts | HIS+Muts |
Table 2. 表達(dá)載體信息
| 表達(dá)類型 | 載體名稱 | 篩選標(biāo)記 | 啟動子 |
| 胞內(nèi)表達(dá) | pAO815 | HIS4 | AOX1 |
| pPIC3K | HIS4 | AOX1 | |
| pPIC3.5K | HIS4 | AOX1 | |
| 分泌表達(dá) | pPICZα,A,B,C | bler | AOX1 |
| pPIC9K | HIS4 | AOX1 |
對于胞外表達(dá)的蛋白除了可以用載體自帶的信號肽，還有以下信號肽可供選擇：
Table 3 . 信號肽序列
| 信號肽 | 蛋白序列 |
| AlphaMF* | MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLEGDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEA |
| Dse4 | MSFSSNVPQLFLLLVLLTNIVSG |
| Exg1 | MNLYLITLLFASLCSA |
| Scw11 | MLSTILNIFILLLFIQASLQ |
| SAlb | MKWVTFISLLFLFSSAYS |
